1985年,李幼斌进入长春电影制片厂,并主演电影《死证》,27岁的他扮演一位40多岁的东北抗日联军的师长。1987年,李幼斌在电影《天谷》中担任男主角。1988年,李幼斌在自己的第一部电视剧《她曾经是我的妻漏享店子》中扮演主角。1994年,在电视剧《潮起潮落》中扮演主角鲁明宽。1999年参演电影《横空出世》,在其中扮演陆光达。
2000年,李幼斌在《非常代价》中扮演马超。参演电影《横空出世》。2004年在电影《惊涛骇浪》中扮演张子明,获得第9届华表百花最佳男演员奖提名。2005年在电视剧《亮剑》中扮演李云龙,和童蕾、何政军、张光北等人合作。获得第23届中国电视金鹰奖观众喜爱的男演员奖 。
2006年,李幼斌主演《闯关东》,和萨日娜、刘向京、朱亚文等人合作。2007年,在电视剧《仁者无敌》中扮演皮德贵。2009年,根据红色经典巨著《红日》改编的同名电视剧开播,李幼斌在剧中参与演出国民党高级将领张灵甫。
2010年,李幼斌在谍战剧《旗袍》中扮演钱鹏飞,和马苏、王志文合作。同一年在夏雨主演的电视剧《师傅》中扮演老铁。仔盼府2011年,在《国门英雄》中扮演关汉生,和史兰芽、张志坚、田子田合作。2012年,参演《老严有女不愁嫁》,饰旋战雅演的是爱女如命,对未来女婿挑剔万分的倔强岳父。2013年,主演电影《雷锋的微笑》,和万思维、唐国强等人合作。同一年在《爱的保镖》中扮演孙海山。10月份,主演悬疑剧《别让我看见》,扮演老刑警刘玉生。2014年5月份,在家庭轻喜剧《孙老倔的幸福》中,扮演孙老倔。9月份,主演谍战剧《邮差》。2015年3月份,在《决战江桥》扮演抗战英雄马占山将军。2017年11月份,主演主旋律电影《中国企业家》。
2019年6月26日,李幼斌李幼斌、史兰芽夫妻第一次共同参与演出话剧《老式喜剧》在北京人艺实验剧场首演;同一年9月份,特别参与演出的战争电影《九条命》发布了首支先导预告片;10月16日,和张明健、李君峰、吴其江等合作主演的抗战剧《一马三司令》首播。
2020年9月30日,李幼斌参加2020央视国庆晚会《“中国梦·祖国颂”——2020国庆特别节目》,讲述《从长江畔到黄鹤楼》;11月13日,特约参与演出的川军抗战电影《九条命》上映。11月16日与陈星旭、胡冰卿、王学圻主演的当代工业青春励志剧《最好的时代》播出。2021年5月14日,李幼斌特别参与演出电视剧《王牌部队》发布传承版海报。
李幼斌人物评价李幼斌的表演对人物的性格和心理把握得很准确。(冯骥才评)
李幼斌赋予了人物一种迷人的气质,给大多数观众留下了深刻印象。(陈健评)
李幼斌塑造过众多英雄形象,被认为是“大器晚成”的演技派演员的代表。深沉、犀利、有城府,长期舞台演出的经验积累使他擅长对角色的内心体验,塑造的角色有血有肉,特别是反面人物不脸谱化,真实可信。(深圳晚报 评)